Monkeypox Virus Kit PCR Dema Rastî
Hûrguliyên hilberê
Bikaranîna Mebest
Ew ji bo tespîtkirina Vîrûsa Monkeypox di nimûneyên seruma mirovî an derziya birîn de bi karanîna pergalên PCR-ya rastîn tê bikar anîn.
Prensîba Testê
Ev hilber pergala ceribandina PCR-ya rast-ê ya Taqman®-a-based sonda fluorescent e.Pîmer û sondayên taybetî ji bo tespîtkirina gena F3L ya Vîrûsa Monkeypox hatine çêkirin.Kontrola navxweyî ya ku genê parastî yê mirovî hedef digire berhevkirina nimûneyê, hilgirtina nimûneyê û pêvajoya PCR-ya rast-demê dişopîne da ku ji encamên derewîn-neyînî dûr bixe.Kit pergalek lîofîlîzekirî ya bi tevahî premix e, ku tê de materyalên ku ji bo tespîtkirina Vîrûsa Monkeypox hewce ne hene: enzîma zêdekirina asîda nukleîk, enzîma UDG, tamponek reaksiyonê, primer û lêpirsînek taybetî.
Naveroka sereke
Parçeyên pêşkêşkirî di tabloyê de têne navnîş kirin.
| Components | Pakêt | Pêvok |
| Vîrûsa MonkeypoxêPremix lyophilized | 8 lûleyên PCR-ê yên strip× 6 kîsik | Primer, sondaj, dNTP/dUTP Mix, Mg2+, Taq DNA polymerase, UDG Enzyme |
| Kontrola erênî ya MPV | 400 μL× 1 tube | Rêzên DNA yên ku gena Target dihewîne |
| Kontrola neyînî ya MPV | 400 μL× 1 tube | Rêzên ADNyê yên ku beşa gena mirovan vedihewîne |
| Çareseriya hilweşandinê | 1 mL×1 lûle | Stabilizer |
| Sertîfîkaya Hevgirtinê | 1 perçe | / |
Operasyona Flow
1. NimûneBerhevkirî:Nimûne divê li gorî boriyên sterîl were berhev kirin
bi taybetmendiyên teknîkî yên standard.
2. Amadekirina Reagentê (Qada Amadekirina Reagentê)
Parçeyên kîtê derxin, ji bo karanîna standby-ê li germahiya odeyê hevseng bikin.
3. Pêvajoya Nimûneyê (Herêma Pêvajoya Nimûne)
3.1 Derxistina asîda nukleîk
Tête pêşniyar kirin ku ji bo derxistina asîda nukleîk, li gorî hewcedarî û prosedurên têkildar ên kîtên derxistina DNA-ya virusê, 200 μL nimûneyên şil, Kontrola Pozîtîf û Kontrola Negatîf bigirin.
3.2 Toza lyophilized hilweşandin û pêvekirina şablonê
Li gorî hejmara nimûneyan pêşmiksek Lyophilized Virus Monkeypox amade bikin.Nimûneyek pêdivî ye ku yek boriyek PCR-ya ku tê de toza premiks a Lyophilized heye.Kontrola neyînî û kontrola erênî divê wekî du nimûneyan were hesibandin.
(1) 15 μL Çareseriya Hilweşînê li her lûleya PCR-ê ya ku tê de premiksa Lyophilized heye lê zêde bikin, dûv re bi rêzê 5 μL nimûneyên derxistinê / Kontrola neyînî / Kontrola erênî li her lûleya PCR zêde bikin.
(2) Tîpên PCR-ê hişk veşêrin, lûleyên PCR-ê bi destê xwe bihejînin heya ku toza lyophilized bi tevahî were hilweşandin û tevlihev kirin, şilê li binê lûleyên PCR-ê bi santrîfujasyonek nizm a tavilê berhev bikin.
(3) Ger ji bo tespîtkirinê amûrek PCR-ya rast-a-dem a hevpar bikar bînin, wê hingê rasterast lûleyên PCR-ê veguherînin qada zêdekirinê;heke ji bo tespîtkirinê BTK-8 bikar bînin, wê hingê pêdivî ye ku van operasyonan pêk bînin: 10 μL şilav ji lûleya PCR veguhezînin bîra çîpê reaksiyonê ya BTK-8.Yek lûleyek PCR bi yekî li ser çîpê re têkildar e.Di dema xebata pipetkirinê de, pê ewle bine ku pipet 90 derece vertîkal e.Pêdivî ye ku tîrêjên pîpeta astengiya aerosolê bi hêzek nerm li navenda bîrê werin danîn û gava ku ew digihîje pêlava yekem (ji bo ku ji bilbilan dûr nekevin) pêlkirina pipetê rawestînin.Piştî ku bîr hatin dagirtin, membranek çîpê reaksiyonê derxînin da ku hemî bîran veşêre û dûv re çîp tê veguheztin qada tespîtkirina amplifikasyonê.
4. PCR Amplification (Herêma Detection)
4.1 Tîpên PCR/çîpa reaksiyonê bixin nav tanka reaksiyonê û navên her reaksiyonê di rêza têkildar de bi cîh bikin.
4.2 Mîhengên tespîtkirina floransê: (1) Vîrûsa Monkeypox (FAM);(2) Kontrola Navxweyî (CY5).
4.3 Protokola bisiklêtê ya jêrîn bimeşînin
Protokola ABI7500, Bio-Rad CFX96, SLAN-96S, QuantStudio:
| Steps | Germî | Dem | Cycles | |
| 1 | Pre-denaturation | 95℃ | 2 min | 1 |
| 2 | Denaturasyon | 95℃ | 10 s | 45 |
| Annealing, dirêjkirin, bidestxistina fluorescence | 60℃ | 30 s | ||
Protokola BTK-8:
| Steps | Germî | Dem | Cycles | |
| 1 | Pre-denaturation | 95℃ | 2 min | 1 |
| 2 | Denaturasyon | 95℃ | 5 s | 45 |
| Annealing, dirêjkirin, bidestxistina fluorescence | 60℃ | 14 s | ||
5. Analîzkirina Encaman (ji kerema xwe serî li Destûra Bikarhênerê Instrumentê bidin)
Piştî reaksiyonê, encam dê bixweber bêne tomar kirin.Ji bo analîzkirinê "Analyze" bikirtînin, û amûr dê bixweber nirxên Ct yên her nimûneyê di stûna encamê de şîrove bike.Encamên kontrolê yên neyînî û erênî dê li gorî "6. Kontrola Kalîteyê" li gorî jêrîn bin.
6. Kontrola Kalîteyê
6.1 Kontrola negatîf: Di kanala FAM de Ct an Ct> 40 tune, di kanala CY5 de Ct≤40 bi kêşeya zêdekirina normal.
6.2 Kontrola pozîtîf: Ct≤35 di kanala FAM-ê de bi kêşa zêdekirina normal, Ct≤40 di kanala CY5 de bi keviya zêdekirina normal.
6.3 Encam derbasdar e heke hemî pîvanên jorîn werin bicîh kirin.Wekî din, encam nederbasdar e.
Şirovekirina Encamê
Encamên jêrîn gengaz in:
| Nirxa Ct ya kanala FAM | Nirxa Ct ya kanala CY5 | Jêfêhmî | |
| 1# | No Ct an Ct>40 | ≤40 | Vîrûsa Monkeypox neyînî |
| 2# | ≤40 | Her encamek | Vîrûsa Monkeypox erênî |
| 3# | 40-45 | ≤40 | Re-test;heke ew hîn jî 40~45 e, wekî 1# rapor bikin |
| 4# | No Ct an Ct>40 | No Ct an Ct>40 | Seqet |
NOT: Ger encamek nederbasdar derkeve, pêdivî ye ku nimûne ji nû ve were berhev kirin û ceribandin.
Order Information
| Navê hilberê | Pisîk.Na | Mezinayî | Perçê ceribandinê | Jiyana Refê | Trans.& Sto.Temp. |
| Monkeypox Virus Kit PCR Dema Rastî | B001P-01 | 48 test / kit | Serum / Lesion Exudate | 12 meh | -25-15℃ |
